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2022-328
外泌體的研究離不開細胞培養(yǎng)。以腫瘤相關(guān)外泌體研究為例，目前，收集腫瘤細胞外泌體主要有兩種方法：方法一使用正常培液養(yǎng)細胞再換無血清培液收外泌體。方法二直接使用exosome-freeFBS配制培養(yǎng)基用于培養(yǎng)細胞收外泌體。首先，就是基本的離心條件了，目前超離比較好的就是貝克曼或者日立的了，這兩家超離在行業(yè)內(nèi)算是翹楚了。其次就是離心參數(shù)了：120000g，4℃，離心14h，離心結(jié)果如圖：1：離心后，血清外泌體會富集在管底和管壁；2：吸取血清時，只吸取澄清部分的血清，并且遠離上圖中標...
查看更多2022-325
如何鑒定提取出來的外泌體？以目前外泌體的分離手段很難獲得十分純凈而且單一的外泌體樣品，也沒有任何一個單一實驗可以確定外泌體的存在。根據(jù)國際細胞外囊泡協(xié)會發(fā)表的指導(dǎo)手冊《MISEV2018》，外泌體特征鑒定通過NTA測粒徑分布、TEM電鏡分析形態(tài)、WB檢測標志蛋白三項來驗證。NTA分析樣品中外泌體的粒徑分布和顆粒濃度，TEM電子顯微鏡來觀察樣品中外泌體的形態(tài)特征，WB檢測外泌體標志蛋白。外泌體如何保存？不同時間、溫度的保存對不同的外泌體樣本影響不一；如果研究方向為外泌體形態(tài)特征...
查看更多2022-324
外泌體抗衰憑什么搶占“風(fēng)頭”？據(jù)研究，在尿液、血清、唾液和母乳等體液中都檢測到了外泌體，可見其分布之廣。從作用原理上，外泌體通過胞吞、胞吐及膜融合的方式進入細胞，將其活性物質(zhì)（如蛋白質(zhì)、DNA、RNA等）釋放至宿主胞質(zhì)溶膠調(diào)控細胞生理功能；也可結(jié)合胞膜受體激活相關(guān)信號通路調(diào)控細胞功能，實現(xiàn)非細胞化再生醫(yī)美治療。另一方面，干細胞進行抗衰是嚴肅的科學(xué)命題，并非簡單的細胞回注就可達到效果，干細胞使用十分嚴格，醫(yī)療機構(gòu)開展的干細胞臨床研究需由兩委局協(xié)同共管，批準才能進行的，臨床許可嚴...
查看更多2022-323
胎牛血清應(yīng)用廣泛，符合質(zhì)控標準是關(guān)鍵以國內(nèi)滅活病毒疫苗的制造過程為例，主要是通過體外大規(guī)模培養(yǎng)特定的細胞株來繁殖病毒。目前，主流培養(yǎng)液仍然采用基礎(chǔ)培養(yǎng)基加血清的方式，強調(diào)了對有效培養(yǎng)方法和一致材料的迫切需求。正規(guī)來源的胎牛血清不會額外添加其他不明成分，除了含有細胞所需的營養(yǎng)成分及輔助因子之外，還含有轉(zhuǎn)移和結(jié)合蛋白，有緩沖pH和解毒的作用，因而常用于疫苗生產(chǎn)細胞的培養(yǎng)。對于牛血清的應(yīng)用場景，目前國內(nèi)遵循的質(zhì)量標準是2020版《中華人民共和國藥典》三部通則（3604新生牛血清檢測...
查看更多2022-322
—胎牛血清有必要熱滅活嗎—01目的血清的滅活就是將血清置于56℃作用30min，然后將它們分裝儲存于-20℃。熱滅活的目的是為了去除血清中的補體等對熱敏感的物質(zhì)，以排除對免疫分析的影響。胎牛血清中對補體的滅活則明顯沒有必要。研究人員曾對商業(yè)胎牛血清中的補體成分進行測定，他們發(fā)現(xiàn)胎牛血清中含有的C1、C6僅達成年動物血清的1-3%，而其它補體成分僅有成年動物的5-50%，至于補體的主要成分C3在胎牛血清中則幾乎不能檢出。通過補體固定實驗，我們也在多個不同批次的胎牛血清中獲得了相...
查看更多2022-321
血清的供應(yīng)量改變帶來的價格波動由于中國海關(guān)總署對供應(yīng)企業(yè)和允許進口的血源地做出了明確規(guī)定，胎牛血清的價格便與這些血源產(chǎn)地的供應(yīng)量息息相關(guān)。胎牛血清是一種天然產(chǎn)物，產(chǎn)地牛源的健康狀況和生長環(huán)境尤為重要，當(dāng)牛源產(chǎn)地氣候變化時，會極大的影響胎牛血清的產(chǎn)量。例如2018年澳洲地區(qū)發(fā)生干旱，導(dǎo)致農(nóng)場主不得不屠宰超量的牛以避免損失，這種情況間接導(dǎo)致當(dāng)年澳洲血源的胎牛血清供應(yīng)鏈同比往年有一個顯著的增長。所以說，跟一般的商品不同，胎牛血清的供應(yīng)量并非僅由胎牛血清的市場需求決定，而是由當(dāng)年的氣...
查看更多2022-318
一般在拿到細胞后，應(yīng)該注意什么?收到細胞后先不要開蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議對收細胞時的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細胞100X，200X各一張)，排除細胞本身污染的情況;收到細胞未開封，出現(xiàn)污染狀況一般可以再申請免費發(fā)送一株細胞。收到細胞時如無異常情況，請在顯微鏡下觀察細胞密度，如為貼壁細胞，未超過80%匯合度時，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培...
查看更多2022-317
血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該如何處理？血清在解凍過程（包括沒有*解凍）或儲存在2-8℃時，血清中的各種蛋白和脂蛋白（如凝集素、纖維蛋白原和玻連蛋白等）可能會聚集成團，形成絮狀沉淀或外觀混濁；在運輸過程中，由于時間較長，所以往往有少許解凍，因此也可能稍有沉淀，但這些都不影響血清性能。若您欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi)，以400g稍微離心，上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因為它可能會阻塞過濾膜。
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